为探究环磷酰胺对肺类器官的毒性作用，本研究分别采用0、1、5、10和20mmol/L的环磷酰胺处理成熟肺类器官，并观察了24、48和72h后的形态变化，并通过qRT-PCR检测了相关条件下的DNA损伤标志基因CDKN1A的表达水平。结果显示，在1mmol/L环磷酰胺处理组中，各时间点类器官形态均未发生显著改变，相应地，CDKN1A的mRNA表达水平与对照组相比亦无统计学差异。当浓度升至5mmol/L时，48h后开始出现轻微的分支结构回缩，同时CDKN1A表达出现轻微上调。
 

在10mmol/L环磷酰胺作用下，48h后可观察到明显的分支回缩及部分细胞分散，且CDKN1A表达急剧上调，达到整个实验中的峰值，显著高于其他所有组别；72h后类器官结构近乎完全破坏，此时CDKN1A表达水平相较于48h峰值虽略有下降，但仍显著高于对照组。而在20mmol/L环磷酰胺处理下，各时间点类器官均发生近乎完全的结构崩解。综合形态学与基因表达分析，10mmol/L环磷酰胺处理48h能稳定诱导出显著且可重复的类器官损伤，同时伴随CDKN1A表达的峰值响应，表明此阶段DNA损伤应答最为强烈。因此，本研究筛选此条件用于后续实验。进一步通过流式细胞术评估该条件下的细胞凋亡情况，结果显示，与对照组相比，经10mmol/L环磷酰胺处理48h后，肺类器官中早期凋亡细胞比例上升，证实环磷酰胺在此条件下可有效诱导肺类器官发生显著的程序性细胞死亡。
 

出自《人源肺类器官模型在评估环磷酰胺肺毒性及其潜在机制中的应用》作者王一迪，李晓彤，朱恒。