目前常用的消化试剂包括TrypLE™Select/Express、Accutase、Accumax及低浓度trypsin/EDTA等。TrypLE™为重组酶制剂，成分相对明确、批间差异较小，适用于将人肠道类器官制备为单细胞悬液。Tanaka等在建立人十二指肠类器官来源药物吸收单层模型时，将细胞消化方式列为影响模型稳健性的关键参数，并以细胞生长面积和TEER作为评价指标；结果显示，与0.05％trypsin/EDTA相比，TrypLE™处理后单层细胞生长面积和TEER表现更佳，因此最终选择TrypLE™作为消化酶。
 

该研究的具体流程为：类器官碎片经离心后加入2.5×TrypLE™Select，在37℃水浴中消化5～10min，再经吹打、70μm滤网滤过、离心和计数后接种于Transwell。这提示消化酶的选择不应仅依据操作习惯，而应结合单层形成效率、TEER和后续功能指标进行筛选。消化终点应通过显微镜动态判断。一般而言，当类器官结构松散、边缘模糊，并解离为单细胞或少量小细胞团，而未出现大量细胞碎片、死亡细胞或黏稠絮状DNA样物质时，可及时终止消化。对于以均一单层和高贴附效率为目标的模型，也可采用较温和的Accutase或Accumax进行单细胞化处理。
 

出自《小肠类器官来源屏障模型在药物吸收评价中的应用进展》作者张克霞，翟珊，张洲。