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问:光学成像检测的荧光标记方法是怎样的呢?2022-03-29 10:12:14

答:通过光学成像技术检测荧光蛋白的表达是长期追踪干细胞移植的有力工具,如Fluc可催化荧光素产生低能量光子,这些电子可以被Fluc成像系统或采用生物发光成像系统的电荷耦合器件相机捕获并成像。当Fluc与底物D-荧光素相互作用时会发光,该光学信号可被BLI的感光设备捕获。Zhu等将Fluc2基因转导至NK细胞,并用BLI技术追踪其在具有肺转移或异种移植甲状腺癌的模型小鼠中的迁移。成像结果显示,NK-Fluc2细胞在1h内迁移并浸润到肺肿瘤中,并停留长达24h,在48h时数量减少。最近的一项研究结果表明,携人甲状腺癌或人乳腺癌小鼠iv给予Fluc2基因转导的人MSC,使用BLI观察到MSC-Fluc2迁移至甲状腺和乳腺癌部位。

生物发光技术虽已取得较大进步,但荧光蛋白的激发和发射波长较短,组织穿透能力有限,灵敏度不高,且很多报告基因表达不很稳定,可能会导致突变发生,甚至形成肿瘤。这种缺陷可选用荧光染料对干细胞进行直接染色来克服。然而,这种通过光学成像检测的荧光标记方法很大程度上限于组织表面以下几百微米,不适用于临床深层组织成像。为检测到更深的组织部位,可使用放射性核素标记方法,灵敏度高且不受深度限制。
 
细胞疗法可分为基因修饰疗法和非基因修饰疗法,前者需要利用基因工程提高细胞疗效,如基因修饰的CAR-T细胞等;后者则不需要利用基因工程技术,包括所有目前批准的干细胞疗法和肿瘤浸润淋巴细胞疗法。
 
出自《细胞治疗产品非临床活体示踪方法研究进展》作者王舒哲,许波华,王雁。