问：人牙周膜干细胞如何鉴定？2022-10-24 13:45:45
答：取第3代生长状态良好的细胞，0.25％胰酶消化后PBS洗涤3次，然后用PBS重悬制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1×108L-1，每个流式管中加入5μL细胞悬液，再分别向管中加入50μLPE标记的CD90、CD105、CD146、STRO-1单克隆抗体以及PE标记的CD34、CD45作为阴性对照，轻轻摇晃混匀，4℃避光孵育30min；PBS洗涤3次后用PBS重悬，流式细胞仪上机检测。另取第3代生长状态良好的细胞，以每孔2×103个的细胞密度接种于3.5cm2细胞培养皿中，待细胞融合至50％时，换为成骨和成脂诱导培养液，每3d更换1次诱导液，成骨诱导培养液诱导14d及成脂诱导培养液诱导21d后弃去培养液，PBS冲洗3次，40g/L多聚甲醛固定30min，采用茜素红染色和油红O染色鉴定培养细胞的成骨和成脂向分化结果。
1.4.3CCK-8检测不同浓度钙离子对人牙周膜干细胞增殖的影响第3代人牙周膜干细胞生长至80％-90％时胰酶消化、离心，以含钙离子浓度为0（对照组），1，2，5，10，15 mmol/L的完全培养基重悬，调整细胞密度以1×104/孔接种于96孔板，每组设置3个复孔，置于细胞培养箱，每隔3d换液1次，分别于培养第1，3，5，7天每孔加入10μLCCK-8试剂，孵育2h后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，取复孔平均值。
出自《不同浓度钙离子干预人牙周膜干细胞的增殖和成骨分化》作者李颖辉,齐芳芳,韩行
