问： 细胞外囊泡如何提取及鉴定？2024-07-29 10:04:41
答：按方法分离培养EMSCs，其中胎牛血清替换为去除细胞外囊泡胎牛血清（将胎牛血清用超速离心机100000×g离心16h），收集传代培养的第3-5代EMSCs上清液约20mL，采用超速离心法提取EMSC-EVs。所有离心操作均在4℃条件下完成，其他步骤均在冰上操作。高速离心机500×g离心10min去除漂浮于上清液中的EMSCs和部分死亡细胞；2000×g离心15min去除细胞碎片；超高速离心机10000×g离心30min去除亚细胞碎片；0.22μm无菌滤器过滤上清液后使用超速离心机100000×g离心3h；PBS重悬沉淀物，重复超速离心1次；最后用100μLPBS重悬沉淀，分装保存于 -80℃备用。使用BCA试剂盒检测细胞外囊泡的蛋白浓度；透射电镜观察获得的细胞外囊泡形态；采用动态光粒子散射仪检测所获得的囊泡粒径大小；采用Western blot检测细胞外囊泡特异性标记CD9、CD63和TSG101蛋白表达。出自《外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡促进神经元轴突的伸长》作者:孙海涛,任春朋,杨永涛.
下一篇： 问：什么是免疫组织化学？
