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问:Western blot检测mTOR的表达是什么?2024-08-05 09:23:18

答:各组细胞分别加入RIPA缓冲液提取总蛋白,10μg/孔等量上样,进行12%十二烷基磺酸钠⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS⁃PAGE),电转至PVDF膜,5%脱脂奶粉封闭;分别加入兔抗p(Ser2448)⁃mTOR、mTOR、GAPDH(1∶500)多克隆抗体,室温孵育过夜;TBST洗膜3次,每次8min;加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗(1∶2000)室温孵育2h;TBST洗膜3次,每次5min。取等量ECL化学发光A、B液混匀,滴在膜上显色。暗室中采用X胶片曝光,采用图像分析系统分析各条带的灰度值。

出自《白藜芦醇对人骨髓间充质干细胞自发衰老的抑制作用》作者:杨玥,何建新.