干细胞干性标志物受消毒副产物影响2026-07-20 08:40:33
根据文献报道，碘乙酸及三氯甲烷人体血液检测浓度在nmol∙L−1水平。碘乙酸及三氯甲烷对于MSCs细胞毒性的EC20值分别为1μmol∙L−1和2.3mmol∙L−1。为避免细胞毒性对细胞分化干扰效应评估的干扰，并确保暴露浓度具备环境相关性，本研究采用人体样本检测浓度与体外细胞毒性阈值之间的剂量区间作为暴露浓度范围。将MSCs以每孔5000个的密度接种于96孔板。当细胞汇合度达到85％，将细胞进行暴露，每个浓度组设立3个平行。暴露48h后，在避光条件下每孔加入100μL含有10％CCK-8工作液的低糖培养基，放入细胞箱中37℃孵育1.5h，使用酶标仪测定450nm处的吸光度。使用Origin软件对浓度-效应关系进行拟合，并估算半数致死浓度，使用细胞毒性指数反映消毒副产物的细胞毒性大小。在24孔板中放入爬片，将MSCs以每孔30000个的密度接板于24孔板中，待细胞汇合度至80％更换培养基，暴露培养基以500μL每孔加入。暴露48h结束后，使用体积分数为4％多聚甲醛固定细胞15min。加入封闭缓冲液200μL，置于振荡器中封闭60min。加入一抗稀释液200μL，用锡纸包裹孔板，4℃孵育过夜。复温30min后，加入二抗稀释液200μL，避光孵育2h，加入DAPI试剂孵育5min。
使用荧光显微镜对标志蛋白及细胞核的染色情况进行观察，用ImageJ软件对荧光强度进行分析。以DAPI荧光强度作为内参，利用蛋白荧光强度与DAPI荧光强度作比，以消除细胞数量等因素对荧光定量结果的影响。基于美国国家环境保护局基准剂量技术指南，采用基准剂量软件分析典型消毒副产物的浓度响应关系，计算体外细胞实验的基准剂量可信下限。以赤池信息准则值最低为最佳BMDS模型，估计出与对照组响应率为10％时的BMD值。使用每个效应指标的个体基准剂量下限10％的倒数和来确定起始点，预测消毒副产物对间充质干细胞分化能力的干扰。
出自《碘乙酸和三氯甲烷对间充质干细胞多向分化的干扰作用及健康风险识别》作者郭俊岩，程佩双，郎玥明。
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