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不同来源凋亡细胞外囊泡的制备及鉴定方法2026-08-31 08:38:44

凋亡细胞外囊泡是细胞程序性死亡过程中产生的膜包被囊泡结构,根据其形态和大小可分为凋亡小体、凋亡微泡和凋亡外泌体3个亚型。凋亡细胞外囊泡的制备一般包括凋亡诱导、分离纯化及表征鉴定3个关键步骤。通过药物或物理方法等诱导细胞凋亡,使其释放凋亡细胞外囊泡。诱导时间需严格控制,以确保凋亡细胞外囊泡的充分形成。其中药物诱导通过特异性激活凋亡信号通路产生凋亡细胞外囊泡,其分子组成相对稳定、功能活性明确,是基础机制研究的常用方法,但产量有限且诱导周期较长;物理诱导通过直接物理应激快速触发凋亡,操作快捷且可能获得更高产量,然而可能引发更广泛的细胞应激,导致产生的凋亡细胞外囊泡异质性较高,内容物和功能的一致性可能受到影响。

此外,不同细胞来源的凋亡细胞外囊泡存在功能差异:间充质干细胞来源的凋亡细胞外囊泡,富含抗炎miRNA,核心优势在于免疫调节与组织再生,是治疗慢性炎症性创面的优选;脂肪干细胞来源的凋亡细胞外囊泡携带miR-21-5p等分子,通过诱导巨噬细胞M2极化等方式,显著促进血管生成与胶原沉积,加速伤口愈合。其功能对预处理条件较敏感,是工程化改造研究的焦点;内皮细胞来源的凋亡细胞外囊泡富含促血管生成分子,通过激活PI3K/Akt/VEGF等通路增强血管化,在加速血供重建方面具独特优势,适用于缺血性创面。凋亡细胞外囊泡的分离与纯化常用差速离心法。
 
该方法操作简便、适用性广,但其纯度有限。为进一步提高纯度,部分研究采用密度梯度离心精细分离,然而操作繁琐、耗时较长,且样本处理量较小。因此,在实际应用中常将二者联用:先以差速离心法初步富集,再经密度梯度离心进一步纯化,以兼顾产量与纯度。表征鉴定与质量控制是确认囊泡性质与活性的关键环节。通常从形态、粒径分布及分子标志等方面综合评价:通过透射电镜观察囊泡形态,采用纳米颗粒追踪分析或动态光散射测定粒径及浓度;结合免疫印迹法、流式细胞术等检测磷脂酰丝氨酸外翻、

Caspase切割蛋白等凋亡相关标志物的表达,以系统评估其结构特征与生物学活性。
出自《凋亡细胞外囊泡在伤口治疗中的研究进展》作者肖淼,覃璇,杨礼睿。