流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志物2022-08-15 08:43:34
取第3代人脐带间充质干细胞，胰酶消化制成单细胞悬液，调整细胞数约2×105个，分别加入鼠抗人CD105-PE、CD90-FITC、CD45-PE、CD34-FITC、CD14-FITC、CD73-PE、CD11b-PE、HLADR-FITC单克隆抗体，同型对照抗体作为阴性对照，室温避光染色20min，应用流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。多发性骨髓瘤RPMI8226和U266细胞用含体积分数为10％胎牛血清的1640培养基培养，将1×106个细胞接种到100mm2细胞培养皿中，当细胞达到80％融合时，800r/min离心5min，取上清，收集细胞上清液，用0.22μm滤器过滤除去活细胞、死细胞和细胞碎片，-80℃保存备用。正常条件下，含体积分数为10％胎牛血清的L-DMEM完全培养基为对照组，实验组以完全培养基与RPMI8226或U266细胞上清液体积比为4∶1稀释作为条件培养液。将处于对数生长期的第3代人脐带间充质干细胞接种于96孔培养板中，2×103个/孔，每组设6个重复孔，加入含体积分数为1％胎牛血清的L-DMEM培养基作用12h使细胞同步化，然后对照组加入含体积分数为10％ 胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养，实验组加入含多发性骨髓瘤细胞条件培养液的L-DMEM完全培养基，37℃，体积分数为5％ CO2培养箱培养12，24，48h后，加入10μLCCK-8溶液，继续培养1h，应用酶标检测仪于450nm波长处检测各孔吸光度值。
出自《多发性骨髓瘤细胞条件培养液对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响》作者杨姁,王飞清,赵嘉宁。
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