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结晶紫染色观察细胞形态2022-08-15 08:45:44

取状态良好的第3代人脐带间充质干细胞以2×104个/孔接种于24孔板内,加入含体积分数为1%胎牛血清的L-DMEM培养基作用12h使细胞同步化,对照组更换为含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养,实验组更换为含多发性骨髓瘤细胞条件培养液的L-DMEM完全培养基培养,培养24h后收集细胞,PBS清洗2遍,40g/L多聚甲醛固定30min,PBS清洗两三次,结晶紫染色30min,PBS清洗两三次,晾干后镜检。

取生长状态良好的第3代人脐带间充质干细胞,以2×104个/孔接种于24孔板内,加入含体积分数为1%胎牛血清的1640培养基作用 12 h 使细胞同步化,待细胞贴壁后,吸弃旧培养基,按实验要求对照组更换为含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM 完全培养基培养,实验组更换为含多发性骨髓瘤细胞条件培养液的L-DMEM完全培养基培养,继续培养24h,加入1000∶1 的EdU标记液在37℃温箱内孵育2h,PBS洗涤细胞2次,40g/L多聚甲醛固定30min,2mg/L甘氨酸溶液中摇床孵育5min,PBS洗涤5min,0.5%TritonX-100摇床10 min,PBS洗涤5min,荧光染料避光孵育30min,PBS洗涤5min/次,共3次,然后用倒置荧光显微镜成像,实验重复3次。相对荧光强度 =(红色荧光细胞数/蓝色荧光细胞数)×100%。
 
在6孔培养板背后每隔1cm用记号笔划直线进行标记,取生长状态良好的第3代人脐带间充质干细胞接种于6孔培养板中,1×105个/孔,待细胞融合度达到100%后,用200μL移液器枪头垂直于培养板在细胞表面划直线,该直线与6孔培养板背后的标记线垂直交叉,PBS冲洗细胞3次,弃去被刮出的细胞,以此时为观察起点,根据实验分组,对照组更换为2mLL-DMEM完全培养基,实验组更换为2mL含多发性骨髓瘤细胞条件培养液的L-DMEM完全培养基培养,培养24h后观察划痕的愈合情况,实验重复3次,用ImageJ软件分析细胞相对迁移率。细胞相对迁移率=(0h划痕宽度-24h后的划痕宽度)/0h划痕宽度。
 
出自《多发性骨髓瘤细胞条件培养液对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响》作者杨姁,王飞清,赵嘉宁。