表达载体的构建2022-01-04 08:41:32
临床基因治疗方案最早是针对造血系统疾病。在体外经过基因转导纠正的细胞回输到患者体内以获得治疗。原则上，可以认为DMD患者的成肌细胞也可以在体外分离和处理。将纠正后的成肌细胞移植到患者肌肉中，以期恢复正常的肌肉功能。由于成肌细胞在发展为肌细胞之前可以大量增殖，单个成肌细胞或肌源性干细胞便可以纠正大量肌肉组织。但来自DMD患者自身成肌细胞的复制能力很低，极大地限制了体外细胞的培养、纠正和再转移的可能性。异源成肌细胞移植可以将正常的DMD基因带入体内，但收效甚微。且异源成肌细胞受到供体细胞免疫排斥和大规模体外培养后发展为肌细胞潜能丧失的限制。因此，利用表达载体的构建直接向组织或细胞递送目的基因，就能够克服体外基因转导复制率低和异源成肌细胞移植免疫排斥的问题。只有少数已知的病毒载体，包括腺病毒和疱疹病毒，能够携带长达14kb的Dystrophin cDNA和一个启动子。但这类病毒复制能力低、缺乏安全性，因此不被作为载体选用。AAV载体的携带能力为5kb，不能包装14kb的DystrophincDNA。在转基因小鼠中进行的研究表明，高度功能性的短序列肌营养不良蛋白基因可以小于4kb。直接肌肉注射AAV载体可在肌肉中产生高水平和持续的基因转移。但肌肉注射只能局部感染一小块肌肉，无法全身系统性传递。并且肌肉注射往往会引发更多的炎症，比血管输送方法更易诱发T细胞免疫反应。Gregorevic 等使用 AAV-6 型载体包装目的基因注入血管，在提高外周微血管的急性通透性下，高剂量病毒载体可以转染所有成年老鼠的骨骼肌。单次静脉注射AAV-6、AAV-8 和AAV-9 可转染啮齿动物和大型哺乳动物全身肌肉。这些理想的特征促进了AAV作为肌肉基因治疗载体的发展。
在不同AAV载体转染效率的研究中，AAV-8在小鼠中肌肉转导效率较高，AAV-rh74显示了肝脏偏好，AAV-9显示了心脏偏向性。在正常和受影响的狗中所进行的几项研究中测试了高剂量的全身AAV-8 和AAV-9给药。研究表明，AAV介导传递的基因存在于身体的所有肌肉中，但肝脏的含量最高。
出自《载体介导杜氏肌营养不良症的基因治疗研究现状》作者张鹏程，宋亚锋。
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